بیان ژن گلایفوسیت اکسیدو ردوکتاز در میزبان پروکاریوتی (e. coli) و بررسی تجزیه گلایفوسیت در آن
پایان نامه
- وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان - دانشکده کشاورزی زنجان
- نویسنده سعیده آقایی
- استاد راهنما امیر موسوی بهرام ملکی زنجانی
- تعداد صفحات: ۱۵ صفحه ی اول
- سال انتشار 1391
چکیده
گلایفوسیت[n-(phosphonomethyl) glycine] علف کشی غیر انتخابی است که بیشتر از 30 سال در مدیریت علف های هرز مورد استفاده قرار گرفته است. گلایفوسیت از فعالیت آنزیم epsps (5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase) که آنزیمی کلیدی در بیوسنتز اسیدهای آمینه حلقوی است ممانعت می کند. توالی بهینه شده ژن تجزیه کننده گلایفوسیت به نام گلایفوسیت اکسید ردوکتاز به صورت مصنوعی ساخته شده است و در تحقیق حاضر برای مطالعه فعالیت آنزیمی این ژن در حامل بیانی pet28a همسانه سازی گردید. در این تحقیق ابتدا پرایمرهای اختصاصی طراحی و با استفاده از تکنیک pcr قطعه مد نظر تکثیر شده و پس از استخراج قطعه از ژل محصول واکنش اتصال به باکتری e.coli سویه dh5? انتقال داده شد و پس از استخراج پلاسمید از باکتری های تراریخت، حضور قطعه مورد نظر در پلاسمیدها به وسیله هضم آنزیمی تأیید شد و پلاسمیدهای نوترکیب توالی یابی شدند. سپس بیان ژن مذکور در میزبان پروکاریوتی باکتری bl21 e. coli بهینه شد و با روش sds page مورد تایید قرار گرفت. نتایج نشان داد که بهترین شرایط برای بیان ژن مد نظر در سیستم pet، در حضورiptg یک میلی مولار، 6/0=od600، دمای 37 درجه سانتیگراد و 4 ساعت پس از انجام عمل القا، می باشد. به منظور بررسی فعالیت زیستی، باکتری های نوترکیب دارای synth-gox در محیط حداقل فاقد فسفات حاوی غلظت های مختلف گلایفوست کشت داده شدند. نتایج این تست نشان داد که باکتری طبیعی تا غلظت 5/0 میلی مولار گلایفوسیت توان زنده ماندن در محیط حداقل را دارد در صورتی که باکتری های حاوی ژن synth-goxتا غلظت 1 میلی مولار توان زیستن در این محیط را نشان دادند.
منابع مشابه
افزایش تحمل به علف کش گلایفوسیت در نتیجه بیان ژن نوترکیب گلایفوسیت اکسیدورداکتاز (gox) در باکتری اشرشیا کولی
متحمل‌سازی گیاهان زراعی نسبت به علفکش گلایفوسیت از طریق دست‌ورزی‌های ژنتیکی یکی از کاراترین روش‌های موجود در مدیریت علف‌های هرز محسوب می‌شود. راه حل مطلوب برای توسعه گیاهان متحمل در سطح تجاری، به کارگیری ژن‌های عامل آنزیم های تجزیه کننده گلایفوسیت نظیر گلایفوسیت اکسیدورداکتاز در کنار EPSPS مقاوم به گلیفوسیت می‌باشد. ژن گلایفوسیت اکسیدورداکتاز اولین بار از باکتری Ochrobactrum antrophi سویه LBAA...
متن کاملواکنش گیاهان تراریخته برنج حاوی ژن EPSPS به علفکش گلایفوسیت
یکی از مؤثرترین راههای ایجاد گیاهان مقاوم به علفکش گلایفوسیت، دستورزی ژن کد کننده آنزیم EPSPS به منظور کاهش میل ترکیبی گلایفوسیت به این آنزیم است. EPSPS از آنزیم‌های مسیر شیکیمات بوده که مسئول ساخت اسیدهای آمینه حلقوی و نیز انواع متابولیت‌های ثانویه در گیاهان و باکتری‌ها است. بدون حضور آنزیم فوق، موجود قادر به ادامه حیات نخواهد بود. در تحقیق حاضر یکی ازدومین‌های مهم جهت اتصال آنزیم EPSPS که اس...
متن کاملپاسخ کلزای تراریخته با ژن aroA نسبت به تیمار گلایفوسیت
کلزا یکی از با اهمیت ترین دانه های روغنی جهان به شمار میرود. علف‌های هرز یکی از مهمترین عوامل تهدید کننده کشت کلزا (Brassica napus) است. گلایفوسیت علف‌کشی عمومی، آنزیم EPSPS را مهار میکند. یکی از موثرترین راههای ایجاد گیاهان مقاوم به گلایفوسیت، انتقال ژن کد کننده آنزیم EPSPS است. در پژوهش حاضر، یک جهش سه نقطه ای در ژن aroA باکتری E.coli ایجاد کرده سپس ژن مورد نظر را به همراه یک نسخه ژن ...
متن کاملکلونینگ و بیان ژن muc1 در میزبان پروکاریوتی به منظور بکار گیری در تشخیص زود هنگام سرطان سینه
زمینه و هدف: سرطان سینه دومین و شایع‌ترین علت مرگ در میان زنان جهان می‌باشد. غدد پستانی طبیعی و کارسینوماهای پستانی باید تحت کنترل عوامل نظارتی، فعال‌کننده‌ها و مهارکننده‌ها در داخل بافت سینه و همچنین یک سری فاکتورهای رشد، گیرنده‌ها و پروتئین‌ها در خارج از بافت سینه باشند. سطوح آنتی ژن‌های مرتبط با تومور می‌توانند به عنوان شاخص پیش‌بینی در درمان این بیماری استفاده شوند. از روش های نوین درمانی ا...
متن کاملزیرهمسانهسازی و بیان ژن ممزوجی ML1-stxB دارواش در E. Coli و تولید آنتی‌بادی آن در موش سوری
زمینه و هدف: عصاره برگ‌های دارواش (Viscum album L) دارای پروتئین MLI از نوع RIP2 (پروتئین‌های غیرفعال ریبوزومی تیپ 2) با خواص لکتینی هستند. STxB شیگا توکسین به‌عنوان یک ایمونواجوانت و حامل، مطرح بوده و به گیرنده سطح سلولی خود به‌نام Gb3 متصل می‌گردد که روی اکثر سلول‌های بدن بیان می‌شود. در این مطالعه، بیان آنتی‌ژنML1-stxB در E. coli و تولید آنتی‌بادی آن در موش سوری بررسی گردید. روش بررسی: در ا...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
وزارت علوم، تحقیقات و فناوری - دانشگاه زنجان - دانشکده کشاورزی زنجان
کلمات کلیدی
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023